Cat No#:：PH0216

Size：50T | 100T

存儲：室溫(15℃-25℃) 干燥保存，復檢期 12 個月，2℃-8℃保存時間更長。

產品簡介

真菌是具有真核和細胞壁的異養(yǎng)生物，種屬很多，已報道的屬達 1 萬以上，種超過 10 萬個。真菌通常又分為三類，即酵母菌、霉菌和蕈菌（大型真菌）。對于酵母菌和霉菌，可以用玻璃珠處理，而對于大型真菌，可直接用液氮研磨。經過前期處理的菌液，用硅質膜吸附，即可得到高純度的基因組。提取純化后的 DNA，可以直接用于PCR/Real time-PCR，sequencing，Southern blot，mutant analysis，SNP 等下游應用實驗。

產品組分

操作步驟：

使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶體上的標簽。所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。

1、樣品的處理：

1）對于酵母菌，取 1-2ml 培養(yǎng)好的菌液，離心收集，棄上清。加入 200ul 溶液 A，加入 20ul RNase A，再加入 100mg 玻璃珠，在高速振蕩器上振蕩，約 5-10min。

2）霉菌(孢子也可相同處理)：取 50-100mg 菌絲，加 200ul 溶液 A，用玻璃研磨器適當研磨分散菌絲，加入20ul RNase A，再加入 100mg 玻璃珠，在高速振蕩器上振蕩，約 30min。

3）大型真菌（如蘑菇等）：稱取 50-100mg 樣品，倒入適量的液氮，立即研磨重復 3 次，使樣品研成粉末（如無液氮，可加 200ul 溶液 A 后用玻璃研磨器適當研磨），加 200ul 溶液 A，加入 20ul RNase A，再加入 100mg 玻璃珠，在高速振蕩器上振蕩，約 5min。

2、加入 20ul 的蛋白酶 K（10mg/ml），充分混勻，55℃水浴消化 30min，消化期間可顛倒離心管混勻數次。12000rpm離心 2min。將上清轉移到一個新的離心管中。如有沉淀，可再次離心。

3、在上清中加入 200ul 溶液 B，充分混勻。如出現白色沉淀，可放 55℃水浴 5min，沉淀即會消失，不影響后續(xù)實驗。如溶液未變清亮，說明樣品消化不徹底，可能導致提取的 DNA 量少及不純，還有可能導致上柱后堵柱子，請增加消化時間。

4、再加入 200ul 無水乙醇，充分混勻，此時可能會出現絮狀沉淀，不影響 DNA 的提取，將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中，放置 2 分鐘。

5、12000rpm 離心 1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

6、向吸附柱中加入 600ul 漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇)，12000rpm 離心 1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

7、向吸附柱中加入 600ul 漂洗液，12000rpm 離心 1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

8、12000rpm 離心 2min，將吸附柱置于室溫或 50℃溫箱放置數分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，否則漂洗液中的乙醇會影響后續(xù)的實驗如酶切、PCR 等。

9、將吸附柱放入一個干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加 50-200ul 經 65℃水浴預熱的洗脫液，室溫放置 5min，12000rpm 離心 1min。

10、離心所得洗脫液再加入吸附柱中，室溫放置 2min，12000rpm 離心 2min，即可得到高質量的基因組 DNA。

注意事項：

1. 由于真菌種類萬千，對于一些特別難處理的真菌，可用液氮研磨，再用玻璃珠振蕩，蛋白酶 K 處理，一般都可以得到一定量的基因組 DNA，如電泳檢測很弱，一般 PCR 都會有較好結果。

2. 若溶液 A 或溶液 B 中有沉淀，可在 55℃水浴中重新溶解。

3. 如果 DNA 提取量很少，可加長玻璃珠處理時間，如果提取 DNA 成彌散短條帶，可減少玻璃珠處理時間。

4. 洗脫緩沖液的體積最好不少于 50ul，體積過小會影響回收效率；洗脫液的 pH 值對洗脫效率也有影響，若需要用水做洗脫液應保證其 pH 值在 8.0 左右(可用 NaOH 將水的 pH 值調至此范圍)，pH 值低于 7.0 會降低洗脫效率；DNA 產物應保存在-20℃，以防 DNA 降解。

5. DNA 濃度及純度檢測：得到的基因組 DNA 片段的大小與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關。回收得到的 DNA 片段可用瓊脂糖