| 產品名稱 : | PH0502 | 0.25%胰蛋白酶溶液 胰酶細胞消化液(1×)不含EDTA / 0.25% Trypsin Solution without EDTA |
| 產品品牌 : | 飛凈 PHYGENE |
胰蛋白酶(Trypsin)是由胰臟產生沒有活性的胰蛋白酶原分泌到小腸后,小腸內的腸肽酶會活化該酶原,形成胰蛋白酶。胰蛋白酶的特點在于已經活化的胰蛋白酶,能夠繼續活化更多胰蛋白酶原,這種過程即自動催化。胰蛋白酶在小腸工作,它會將蛋白質水解為肽,進而分解為氨基酸,其最適溫度約為37℃。產品簡介
胰蛋白酶(Trypsin)簡稱胰酶,是一種絲氨酸水解酶,能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基端切斷。在組織細胞的提取、培養,以及體外細胞培養過程中,均會使用到胰蛋白酶消化液,用于水解細胞間蛋白質,使組織或細胞離散成單個細胞。胰酶在37℃ pH 8.0條件下消化能力最強。常用胰酶工作濃度為0.25%。EDTA可以螯合鈣鎂離子,胰酶溶液中搭配EDTA使用可以加速細胞間連接蛋白的水解,起到增強消化的效果。酚紅是一種pH指示劑,溶液偏堿性時呈紫紅色,偏酸性時呈橘紅色,近中性時呈粉紅色。
存儲 冰袋運輸,-20℃保存,有效期18個月,建議分裝凍存,避免反復凍融。
操作說明
貼壁細胞的消化:
1、吸去培養液,用無菌的pbs、hanks液或無血清培養液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清.
2、加入少量胰酶細胞消化液,略蓋過細胞即可,室溫放置30秒至2分鐘。不同的細胞消化時間有所不同.
3個、顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養器皿底部發現細胞的形態發生明顯的變化,或者用槍吹打細胞發現細胞剛好可以被吹打下來;此時吸除胰酶細胞消化液;加入含血清的完全細胞培養液,吹打下細胞,即可直接用于后續實驗.
4、如果發現消化不足,則加入胰酶細胞消化液重新消化。
5個、如果發現細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經有部分直接從培養器皿底部脫落,直接用胰酶細胞培養液把細胞全部吹打下來。1000-2000G離心1分鐘,沉淀細胞,盡量去除胰酶細胞消化液后,加入含血清的完全培養液重新懸浮細胞,即可用于后續實驗。
組織的消化:
不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
注意事項
1. 由于組織或細胞性質不同,實驗人員應依據具體情況,確定最佳消化時間;消化細胞時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁和生長狀況。
2. 本產品不含抑菌劑,在使用過程中要特別注意無菌操作,避免消化液被微生物污染。
3. 如含有酚紅指示劑的消化液,可能會因某些原因導致pH略微下降,從而導致溶液顏色由紅色變成橙色。該種橙色的溶液依然可以使用,或者也可采用無菌的2M NaOH溶液對pH進行微調后使用。
4. 本產品不宜4℃長期保存,避免反復凍融,建議分裝成小份后-20℃保存。
5. 對于胰酶中EDTA、酚紅的選擇,可以根據實驗需要,對于一般的腫瘤細胞,選擇含EDTA的胰酶消化液。對于較敏感、脆弱的細胞,例如原代細胞及很容易消化的細胞,選擇不含EDTA的胰酶消化液,如果細胞特別敏感,需要選擇胰蛋白酶濃度更低的消化液。如果需要用于流式細胞儀檢測細胞凋亡,則選用不含EDTA的胰酶消化液。
6. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
溫馨提示:1.本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療,食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。2.為了您的安全和健康,請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。3.實驗結果可由多種因素影響,相關處理只限于產品本身,不涉及其他賠償。
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