產品簡介 

英文名稱：DPPH；2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl；1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical；2,2-Diphenyl-1-(2,4,6-trinitrophenyl)hydrazyl

其他名稱：1,1-二苯-2-苦基肼；1,1-二苯基-2-苦味基肼自由基；2,2-聯苯基-1-苦基肼基；α, α-二苯基-β-苦基肼基；1,1-二苯-2-苦肼基；2,2-二苯基-1-苦基肼；2,2-二苯基-1-苦肼基

CAS號：1898-66-4

C18H12N5O6=394.32

級別：AR

含量：≥98.0%

熔點：～135℃

性狀：黑色粉末，或夾帶一些綠色或金色。

用途：生化研究。

保存：常溫運輸，2～8℃冷藏避光保存，有效期2年

DPPH為暗紫色大棱柱形晶體。mp127～129度（分解）。一般試劑含量不小于97% 該品具有刺激性。吸入、口服或皮膚接觸有害。大量使用應穿適當的防護服和戴手套。主要用途是阻聚劑。也常用于抗氧化成分的體外抗氧化性評價。

DPPH法:DPPH法于1958年被提出，廣泛用于地量測定生物試樣、分類物質好和食品的抗氧化能力。 DPPH在有機溶劑中是一種穩定的自由基，其醇溶液呈紫色，且需低溫避光儲藏，具有單一電子，故能接受一個電子或氫離子，在波長為517nm下具有最大吸收。有自由基清除劑存在時，DPPH的單電子被捕捉而使其顏色變淺，在最大光吸收波長處的吸光值下降，且下降程度呈線性關系，吸光度水平的降低表明抗氧化性的增加，從而以評價試驗樣品的抗氧化能力。此抗氧化能力用抑制率來表示，抑制率越大，抗氧化性越強。

注意事項 

僅供實驗室科研使用！

For laboratory use only. Not for drug, household or other uses.

DPPH is a common abbreviation for the organic chemical compound 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl. It is a dark-colored crystalline powder composed of stable free-radical molecules. DPPH has two major applications, both in laboratory research: one is a monitor of chemical reactions involving radicals, most notably it is a common antioxidant assay, and another is a standard of the position and intensity of electron paramagnetic resonance signals.

疑難解答

問：自由基清除實驗為什么選擇DPPH和ABTS?
答：因為二者都簡單易行，所以，一直沿用。但是，如果結合PTIO自由基清除，則更合理。

問：FRAP法與DPPH和ABTS的區別何在？
答：FRAP是Ferric ion reducing antioxidant power之縮寫。該檢測法是基于鐵離子（Fe3+）還原為亞鐵離子（Fe2+）的還原反應，而設計的。所以，整個反應沒有自由基參與。FRAP只能反應電子轉移能力，不能研究自由基清除的能力。之所以會選用FRAP法，是因為電子轉移是自由基清除的一個機制。所以，FRAP法宜結合DPPH?自由基清除、ABTS+?自由基清除、PTIO?自由基清除才有意義。如果某化合物，經能有效地清除DPPH?自由基、ABTS+?自由基和PTIO?自由基，表明該化合物具有自由基清除能力，或者說有抗氧化活性。在此基礎上，如果該化合物還能還原Fe3+成為Fe2+離子，說明該化合物的抗氧化活性可能通過電子轉移實現。
無疑地，單獨使用FRAP法，無法說明某化合物具有抗氧化活性。


問：DPPH實驗測量抗氧化性的原理是什么？
答：DPPH法于1958年被提出，廣泛用于定量測定生物試樣、分類藥物和食品的抗氧化能力。此法是根據DPPH自由基有單電子，在519nm處有一強吸收，其醇溶液呈紫色的特性。當有抗氧化劑存在時，DPPH自由基被清除，溶液顏色減淡，其褪色程度與其被清除程度（即吸光度的改變）成定量關系，因而可用分光光度計或酶標儀進行快速的定量分析。


問：DPPH自由基被清除的機制是什么？
答：DPPH自由基的清除過程主要涉及到氫轉移（HAT），簡要過程如下：

問：實驗中的溶劑應該怎么確定？
答：優先選用甲醇、95乙醇或無水乙醇溶解DPPH固體和樣品，若樣品難溶于水和醇，再考慮DMSO等溶劑。值得注意的是，實驗中應該盡量保證樣品溶液和DPPH溶液使用相同的溶劑。另兩個實驗（ABTS+?清除和PTIO?清除）同理。


問：樣品的濃度一定要設置成1mg/mL嗎？
答：不同樣品清除DPPH自由基的活性可能相差很大，為了保證結果的準確，應該盡量使樣品的五個濃度點對DPPH?清除率均勻分布在0-100%之間，因此1mg/mL只是一個大概數值，實驗中要根據預試結果進行調整。由于1 mg/mL這個數字方便稀釋和計算，因此在這里統一寫作1mg/mL。另兩個實驗（ABTS+?清除和PTIO?清除）同理。


問：測量完成后怎么計算IC50？
答：IC50值是指清除50%的自由基，所需要的樣品的最終濃度。有兩種計算方法。
第一，以實驗所得的抗氧化劑濃度為橫坐標，清除率為縱坐標，然后計算線性回歸方程。將清除率50%代入方程中求得對應的橫坐標值即為IC50值，注意最終結果將三次或三次以上的平行試驗取平均值。第二，通過濃度曲線的圖直接讀出。在50%處畫一橫線，此橫線與曲線的模擬線的交點的對應的橫坐標，即IC50.
另兩個實驗（ABTS+?清除和PTIO?清除）同理。


問：為什么要用Trolox作為陽性對照？
答：維生素E（生育酚）是常見的抗氧化劑。不過，維生素E難溶于水，而且易變質。為此，化學家將其結構進行修飾，即得 Trolox（化學名稱：6-羥基-2,5,7,8-四甲基色烷-2-羧酸）。Trolox不僅溶于水，而且易溶于有機溶劑，所以，廣泛地用作抗氧化劑的陽性對照物。亦稱水溶性維生素E。為了方便對比評價所測物質的抗氧化能力，通常采用Trolox作為DPPH自由基清除實驗的陽性對照品。另兩個實驗（ABTS+?清除和PTIO?清除）同理。
  當然，除了Trolox外，也可以選用其他化合物作為陽性對照，如BHA, 兒茶素，谷胱甘肽GSH, 維生素C，槲皮素，EGCG等。


問：為什么會出現清除率為負值的情況？
答：樣品的活性太弱，所以，加入的樣品的量較多；如果這個樣本身在519nm處有吸收的話，就會產生一個可觀的A值，導致A>A0,清除率為負。


問： DPPH?清除率會大于100%嗎？
答：理論上講，是不可能的。如果出現這種情況，要檢測實驗本身有沒問題。


問：DPPH和ABTS自由基清除率有什么不同？
答：清除率的計算方法大體相同，只不過檢測的波長不同，也就是所用的A值不同：DPPH用A519nm值；ABTS用A734nm值。這是因為二者的檢測波長本來就不一樣。
    盡管這樣，對于同樣的樣品、同樣的濃度。DPPH和ABTS自由基清除率，會不同。這是因為，ABTS自由基比DPPH自由基更容易清除。換言之，對于同一個樣品而言，清除DPPH的IC50值會大于清除ABTS的IC50值。

DPPH和ABTS對比區別