有效期：12個月
存儲：常溫運輸，2-8 ℃保存, 一年有效！

產品簡介

我們生產的 SDS-PAGE 凝膠配制試劑盒提供了配制 SDS-PAGE 凝膠所需的各種試劑，用戶只需自備制膠器具和蒸餾水，即可配制 PAGE膠(即聚丙烯酰胺凝膠)。SDS-PAGE 凝膠配制試劑盒可用于配制 SDS-PAGE 凝膠，也可用于配制非變性(native)PAGE 凝膠。

本試劑盒約可配制 30-50 塊常規大小的 PAGE 膠(即聚丙烯酰胺凝膠)。

試劑組分


組分 規格 保存
30% Acr-Bis(29:1) 100mL 2-8℃，避光
1M Tris-HCl, pH8.8 100mL RT
1M Tris-HCl, pH6.8 15mL RT
APS（過硫酸銨干粉） 0.5g RT
10%SDS 5mL RT
TEMED 0.5mL 2-8℃，避光


產品保存
Tris-HCl,pH8.8、SDS、Ammonnium persulfate(過硫酸銨)和 Tris-HCl,pH6.8 室溫保存。30% Acr-Bis(29:1)和 TEMED 2-8℃避光保存。過硫酸銨配制成 10%溶液后，分裝成小管-20℃保存，通常半年內有效。


使用參考

一，取5支 1.5ml 離心管，將過硫酸銨干粉分裝成 100mg/支，標記好備用。


二，凝膠制備：


1， 取一支稱好的 100mg 過硫酸銨干粉，加入 1ml 蒸餾水，混勻，此配好的 10%過硫酸銨溶液 2-8℃可保存一周。洗干凈電泳玻璃板，夾好。


2， 根據目標蛋白分子量大小，選取凝膠濃度，按下附表配制。先配分離膠，再配濃縮膠。(可根據用量自行等比加減)


【注意】


1，TEMED 和 10%過硫酸銨最后加，在加入前需混勻前面所加試劑。10%過硫酸銨在 4℃有效期為一周(-20℃三個月)，TEMED 易揮發，使用后請蓋緊瓶蓋。在常溫下膠 30 分鐘內可以凝固，如溫度過低，可放 37℃溫箱凝固。灌完分離膠后，輕輕的加 1ml ddH2O 封上層，膠凝固后可見到分界線。灌濃縮膠前，先傾去水層，再用吸紙吸干。濃縮膠灌好后立刻插入梳子。濃縮膠凝固后，放入電泳液中(讓電泳液漫過加樣孔)，輕輕的撥出梳子，可防加樣孔變形。


2，配制量可按上表等比加減。如果所用膠濃度與上面不同，可自行調整，主要是調整 30%丙烯酰胺的量（需要濃度×總體積/30%），最后用水補足總體積。


三，上樣，電泳，一般是濃縮膠 80V，分離膠 120V 恒壓，等溴酚蘭電泳到合適的位置，結束電泳，染色或者進行下一步實驗。


注意事項
1）過硫酸銨配制成 10%溶液后，應當-20℃保存。同時應盡量減少室溫存放時間，以防失效。
2）TEMED 易揮發，使用后請蓋緊瓶蓋。
3）另外凝膠凝聚的速度和溫度及光照關系密切，可通過適當調節 TEMED 的用量，控制在不同的室內環境下凝膠凝聚的速度。
4）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。


附表： 不同濃度的SDS-PAGE分離膠的最佳分離范圍：
SDS-PAGE分離膠濃度 最佳分離范圍
6%膠 50-150kD
8%膠 30-90kD
10%膠 20-80kD
12%膠 12-60kD
15%膠 10-40kD


成分 配制不同體積SDS-PAGE分離膠所需各成分的體積(毫升)
6%膠 5 10 15 20 30 50
蒸餾水 2.0 4.0 6.0 8.0 12.0 20.0
30%Acr-Bis(29:1) 1.0 2.0 3.0 4.0 6.0 10.0
1M Tris, pH8.8 1.9 3.8 5.7 7.6 11.4 19.0
10%SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5
10%APS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5
TEMED 0.004 0.008 0.012 0.016 0.024 0.04
成分 配制不同體積SDS-PAGE分離膠所需各成分的體積(毫升)
8%膠 5 10 15 20 30 50
蒸餾水 1.7 3.3 5 6.7 10.0 16.7
30%Acr-Bis(29:1) 1.3 2.7 4.0 5.3 8.0 13.3
1M Tris, pH8.8 1.9 3.8 5.7 7.6 11.4 19.0
10%SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5
10%APS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5
TEMED 0.003 0.006 0.009 0.012 0.018 0.03
成分 配制不同體積SDS-PAGE分離膠所需各成分的體積(毫升)
10%膠 5 10 15 20 30 50
蒸餾水 1.3 2.7 4.0 5.3 8.0 13.3
30%Acr-Bis(29:1) 1.7 3.3 5.0 6.7 10.0 16.7
1M Tris, pH8.8 1.9 3.8 5.7 7.6 11.4 19.0
10%SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5
10%APS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5
TEMED 0.002 0.004 0.006 0.008 0.012 0.02
成分 配制不同體積SDS-PAGE分離膠所需各成分的體積(毫升)
12%膠 5 10 15 20 30 50
蒸餾水 1.0 2.0 3.0 4.0 6.0 10.0
30%Acr-Bis(29:1) 2.0 4.0 6.0 8.0 12.0 20.0
1M Tris, pH8.8 1.9 3.8 5.7 7.6 11.4 19.0
10%SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5
10%APS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5
TEMED 0.002 0.004 0.006 0.008 0.012 0.02
成分 配制不同體積SDS-PAGE分離膠所需各成分的體積(毫升)
15%膠 5 10 15 20 30 50
蒸餾水 0.5 1.0 1.5 2.0 3.0 5.0
30%Acr-Bis(29:1) 2.5 5.0 7.5 10.0 15.0 25.0
1M Tris, pH8.8 1.9 3.8 5.7 7.6 11.4 19.0
10%SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5
10%APS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5
TEMED 0.002 0.004 0.006 0.008 0.012 0.02
注：如果配制非變性膠，參考上述配方，不加10%SDS即可配制成非變性PAGE膠。


3.按照如下表格配制SDS-PAGE的濃縮膠(也稱堆積膠、積層膠或上層膠)：
成分 配制不同體積SDS-PAGE濃縮膠所需各成分的體積(毫升)
5%膠 2 3 4 6 8 10
蒸餾水 1.4 2.1 2.7 4.1 5.5 6.8
30%Acr-Bis(29:1) 0.33 0.5 0.67 1.0 1.3 1.7
1M Tris, pH6.8 0.25 0.38 0.5 0.75 1.0 1.25
10%SDS 0.02 0.03 0.04 0.06 0.08 0.1
10%APS 0.02 0.03 0.04 0.06 0.08 0.1
TEMED 0.002 0.003 0.004 0.006 0.008 0.01


注：通常10-30分鐘內膠會凝固。注：具體的凝固時間和溫度及光照有關，說明書中10%APS和TEMED的正常推薦用量是室溫為25℃時的推薦用量。為達到與25℃時相近的凝固時間，當室溫低于25℃時，可以適當同時加大10%APS和TEMED的用量，例如20℃時建議用量是正常推薦用量的1.5倍，15℃時建議用量是正常推薦用量的2倍。