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PH0328 | Lowry蛋白定量試劑盒 (Lowry Protein Assay Kit)

商品貨號 PH0328
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產(chǎn)品名稱 :	PH0328 \| Lowry蛋白定量試劑盒 (Lowry Protein Assay Kit)
產(chǎn)品品牌 :	飛凈 PHYGENE

貨號：PH0328

規(guī)格：500T(微孔) | 1000T(微孔)

保存：BSA 蛋白標準品 4℃保存有效期至少 3 個月，-20℃保存有效期至少一年，其他試劑室溫保存有效期至少一年。試劑開封使用后請及時密閉保存，Folin 酚乙試劑顏色變成深綠色即失效。

產(chǎn)品說明

Folin-酚試劑法包括兩步反應：第一步是在堿性條件下，蛋白質與銅作用生成蛋白質-銅絡合物；第二步是此絡合物將 Folin 試劑還原，產(chǎn)生深藍色，顏色深淺與蛋白質含量成正比。定量范圍為 5～500μg/ml 蛋白質。Folin 試劑顯色反應由酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸引起，因此樣品中若含有酚類、檸檬酸和巰基化合物均有干擾作用。此外，不同蛋白質因酪氨酸、色氨酸含量不同而使顯色強度稍有不同。

試劑組分

組分	500T	1000T
Folin 酚甲試劑 A	100ml	100ml×2
Folin 酚甲試劑 B	5ml	5ml
Folin 酚乙試劑(1N)	10ml	20ml
PBS 稀釋液	30ml	30ml
BSA 蛋白標準品 (5mg/ml )	1ml	1ml

操作說明（以1000T為例）

1.根據(jù)需要量，取適量 Folin 酚甲試劑 A 和 B 按 50:1 混合，混合后有效期為 24 小時，過期失效。

2.根據(jù)需要量，取適量 BSA 標準品用 PBS 稀釋稀釋 10 倍至濃度 0.5mg/ml。若采用酶標儀法(96 孔)

3.將標準品按 0, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 20ul 加到 96 孔板中，加 PBS 補足到 20ul。

4.將樣品作適當稀釋(最好多做幾個梯度)，加 20ul 到 96 孔板的樣品孔中。由于移液器在取小量時的誤差，標準線前面的點誤差比較大，所以盡可能的讓樣品點落在標準線 1/2 后。

5.將配好的 Folin 酚甲試劑每孔加入 200ul，輕輕震動，混勻，室溫放置 10 分鐘。

6.各孔加入 20 微升 Folin 酚乙試劑，迅速混勻，37℃放置 30 分鐘。用酶標儀測定 A650 計算蛋白濃度。

若采用分光光度計法（接上述步驟 2）

3.取八支（或者更多）5ml 離心管，標號，按下表加入試劑。

4.混勻，37℃放置 30 分鐘。分光光度計測定 A650 計算蛋白濃度。

離心管號	1	2	3	4	5	6	7（樣品管1）	8（樣品管2）	9（樣品管 3）
標準蛋白BSA	0μl	40μl	80μl	120μl	160μl	200μl	200μl適當稀釋的樣品1	200μl適當稀釋的樣品2	……
稀釋液（PBS）	200μl	160μl	120μl	80μl	40μl	0μl	0μl	0μl	0μl
Folin 酚甲試劑	2ml	2ml	2ml	2ml	2ml	2ml	2ml	2ml	2ml
混勻，室溫放置 10 分鐘
Folin 酚乙試劑	200μl	200μl	200μl	200μl	200μl	200μl	200μl	200μl	200μl