產品簡介

考馬斯亮蘭 G-250 染料，在酸性溶液中與蛋白質結合，使染料的最大吸收峰的位置（Imax），由 465nm 變為 595nm，在一定的濃度范圍內，測定的吸光度值 A595 與蛋白質濃度成正比。Bradford 法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學物質的影響，樣品中巰基乙*醇的濃度可高達 1M，二硫蘇糖醇的濃度可高達 5mM，但受略高濃度的去垢劑影響，需確保 SDS的濃度低于 0.1%，Triton X-100 低于 0.1%，Tween 20, 60, 80 低于 0.06%。含去垢劑的樣品推薦使用BCA蛋白濃度測定試劑盒。

操作說明

一．微孔酶標儀法

1. 完全溶解蛋白標準品，取 10μL，稀釋至 250μL ，使終濃度為 0.2mg/ml。待測蛋白樣品在什么溶液中，標準品也宜用什么溶液稀釋。但是為了簡便起見，也可以用 0.9%NaCl 或PBS 稀釋標準品。

2. 5×G250 染色液使用前請顛倒 3-5 次混勻，取 1ml 5×G250 染色液，加入 4ml 雙蒸水，混勻成 1×G250染色液，此 1×G250 染色液可在 4℃保存一周。

3. 將標準品按 0,2,4,6,8,12,16,20 微升分別加到 96 孔板中，加 PBS 稀釋液補足到 20 微升。

4. 將樣品作適當稀釋（最好多做幾個梯度，如作 2 倍、4 倍、8 倍稀釋），加 20 微升到 96 孔板的樣品孔中。由于移液器在取小量時的誤差，標準線前面的點可能不很準確，所以盡可能的讓樣品點落在標準線 1/2后。

5. 各孔加入 200 微升稀釋后的 1×G250 染色液，室溫放置 3-5 分鐘。

6. 用酶標儀測定 A595，或 560-610nm 之間的其它波長的吸光度。

7. 根據標準曲線計算出樣品中的蛋白濃度。

二．分光光度計法

如無酶標儀，染色反應可在離心管中進行，反應液混勻后加入比色皿中，使用分光光度計測定吸光值。步驟如下：

1. 取八支（或者更多）干凈的 10ml 離心管，標記上號。

2. 取 100μLBSA 加入 PBS 2.4ml 稀釋至終濃度為 0.2mg/ml。

3. 5×G250 染色液使用前請顛倒 3-5 次混勻，取 10ml 5×G250 染色液，加入 40ml 雙蒸水，混勻成 1×G250 染色液，此 1×G250 染色液可在 4℃保存一周。

4. 按下表加入試劑(以每孔 5ml 計，多余的用來清洗比色皿)

 5. 反應 3 分鐘后測 OD 值。為了實驗的準確性，可每間隔 2 分鐘加一管染色液，每間隔 2 分鐘測一管 OD 值。

如下表：