貨號 PH0516

名稱 蘇木素伊紅(HE)染色試劑盒 / Haematoxylin Eosin (H&E) staining

規(guī)格 2×100mL | 2×500mL

存儲 室溫避光保存，有效期至少12個月

自備材料：

1、鹽酸乙醇分化液
2、藍化液（如稀氨水、碳酸鋰溶液等）
3、系列乙醇
4、4%的多聚甲醛 (Cat#: PH0427)

產(chǎn)品簡介

蘇木精-伊紅染色法 ( Hematoxylin-Eosin staining )，簡稱 HE 染色法 ，是病理學常規(guī)制片中最基本的染色方法。蘇木精染液為堿性 ，主要使細胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核糖體著紫藍色；伊紅為酸性染料，主要使細胞質(zhì)和細胞外基質(zhì)中的成分著紅色 。

染色過程需要優(yōu)化，著色情況與組織或細胞的種類有關，也隨其生活周期及病理變化而改變。例如，很多細胞在新生時期胞漿對伊紅著色較淡或輕度嗜堿，當其衰老時或發(fā)生退行性變則呈現(xiàn)嗜伊紅濃染。膠原纖維在老化和出現(xiàn)透明變性時，伊紅著色由淺變深。

染色原理：

1、 細胞核染色的原理：  蘇木素為堿性天然染料，可使細胞核著色。細胞核內(nèi)染色質(zhì)的成分主要是DNA，在DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)中，兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外，使DNA雙螺旋的外側(cè)帶負電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木素堿性染料以離子鍵或氫鍵結(jié)合而被染色。蘇木素在堿性溶液中呈藍色，所以細胞核被染成藍色。

2、 細胞漿染色的原理：  伊紅是一種化學合成的酸性染料，在一定條件下可使細胞漿著色。細胞漿的主要成分是蛋白質(zhì)，為兩性化合物，細胞漿的染色與染液的pH值密切相關。當染液的pH值在胞漿蛋白質(zhì)等電點(4.7～5.0)以下時，胞漿蛋白質(zhì)以堿式電離，則細胞漿帶正電荷，就可被帶負電荷的酸性染料染色。伊紅在水中離解成帶負電荷的陰離子，與胞漿蛋白質(zhì)帶正電荷的陽離子結(jié)合，使細胞漿著色，呈現(xiàn)紅色。

3、 分化作用：  染色后，用某些特定的溶液將組織過多結(jié)合的染色劑脫去，這個過程稱為分化作用，所用的溶液稱為分化液。在HE染色中常用1%鹽酸乙醇作為分化液，因酸能破壞蘇木素的醌型結(jié)構(gòu)，使組織與色素分離而退色。經(jīng)蘇木素染色后，必須用1%鹽酸乙醇分化，使細胞核過多結(jié)合的蘇木素染料和細胞漿吸附的蘇木素染料脫去，再進行伊紅染色，才能保證細胞核與細胞漿染色的分明。

4、 返藍作用：分化之后，蘇木素在酸性條件下處于紅色離子狀態(tài)，呈紅色；在堿性條件下處于藍色離子狀態(tài)，呈藍色。組織切片經(jīng)酸性乙醇分化后呈紅色或粉紅色，故分化之后，立即用水除去組織切片上的酸而中止分化，再用弱堿性水使蘇木素染上的細胞核呈現(xiàn)藍色，這個過程稱為返藍作用或藍化作用。另外用自來水浸洗也可使細胞核返藍，但所需時間較長。

使用方法

操作步驟（僅供參考）：

（一） 石蠟切片染色

1、 切片脫蠟至水

①二甲苯作用2次，每次5～10min。 
②（可選）無水乙醇作用2次，每次3～5min。                       
③95%的乙醇 3～5min
④90%的乙醇 3～5min
⑤80%的乙醇 3～5min
⑥自來水或蒸餾水沖洗 1～3min

2、染色

①蘇木素染色液染色 5～8min (具體時間根據(jù)染色結(jié)果和實驗要求調(diào)整)
②自來水或蒸餾水沖洗 5～10s
③鹽酸乙醇分化（可選） 2～5s
④自來水沖洗 20～30s
⑤藍化液返藍 20～40s
⑥自來水沖洗 30～60s
⑦伊紅染色液染色 3～5min (具體時間根據(jù)染色結(jié)果和實驗要求調(diào)整)
⑧自來水沖洗 1～5s

2、脫水、透明、封固

①80%乙醇 10～20s 
②90%乙醇 10～20s
③95%乙醇作用2次，每次1～2min。
④無水乙醇作用2次，每次2～3min。
⑤二甲苯透明3次，每次2～3min。
⑥中性樹脂封片。

染色結(jié)果：細胞核呈藍色；細胞質(zhì)、肌纖維、膠原纖維、甲狀腺膠質(zhì)等呈深淺不一的紅色；角蛋白、紅細胞等呈明亮的橙紅色。

 
（二） 冰凍切片染色

冰凍切片不用脫蠟，可固定后直接染色，其方法與石蠟切片相同。

染色結(jié)果：細胞核呈藍色；細胞質(zhì)、纖維呈紅色。

 
（三） 細胞染色

1、4%的多聚甲醛固定10～20min。
2、自來水沖洗2次，每次2min。
3、 蒸餾水沖洗2次，每次2min。 
4、染色、脫蠟、透明、封固步驟同石蠟切片的染色步驟，作用時間相應縮短。

染色結(jié)果：細胞核呈藍色；細胞質(zhì)、纖維呈紅色。

注意事項

1、 切片脫蠟應盡量干凈。
2、 95%乙醇、90%乙醇、80%乙醇應經(jīng)常更換新液。
3、 鹽酸乙醇分化液的分化時間應該依據(jù)切片厚薄、組織的類別以及新舊而定，另外分化后自來水沖洗時間應該足夠，以便徹底清洗酸。
4、 染色過程推薦淺染，通常只需能夠分辨細胞核即可，顏色過深有可能影響細胞質(zhì)顏色。
5、 冷凍切片染色時間盡量要短。
6、 藍化液常使用0.2～1%氨水水溶液或Scoot促藍液或0.1～1%碳酸鋰水溶液。
7、第一次使用本試劑盒時建議先取1-2個樣品做預實驗。
8、 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 Hematoxylin and eosin stain or haematoxylin and eosin stain (H&E stain or HE stain) is one of the principal stains in histology. It is the most widely used stain in medical diagnosis and is often the gold standard (for example, when a pathologist looks at a biopsy of a suspected cancer, the histological section is likely to be stained with H&E). A combination of hematoxylin and eosin, it produces blues, violets, and reds.